NICSROprep™ PCR Clean-up S & V Kit

PCR 증폭산물을 Gene cloning, Sequencing등에 응용하기 위해, primer 및 dNTP제거와buffer exchange를 위해 고안된 제품이다. PCR product 의 정제외에도 enzyme digested DNA fragment, gDNA, plasmid의 순도를 높이거나 농축을 위해서도 폭넓게 응요할 수 있으며, 타사대비 binding capacity가 높은 silica membrane 사용과 합리적인 가격으로 제공되는 장점이 있다.

Key features
Column type	Silica membrane base
Column recovery yield	Up to 90%
Purification method	Centrifugation or Vacuum
Column binding capacity	Up to 50 ug
DNA fragment size	100 bp – 10 kb
Time to process 1 sample	Less than 10 min
Application	Sanger Sequencing NGS Sequencing DNA labeling Cloning

Products list
Cat. no.	BNROP-0019
Scale	200 prep/box
Price	120,000

NICSROprep™ DNA Gel Extraction S & V Kit

TAE 및 TBE buffer 기반의 agarose gel상의 DNA fragment를 분리하기 위해 고안된 제품으로서, 80bp ~ 10kb DNA를 최대 90%의 회수율료 정제할 수 있다. 타사대비 binding capacity가 높은 silica membrane 사용과 합리적인 가격으로 제공되는 장점이 있다.

Key features
Column type	Silica membrane base
Column recovery yield	Up to 90%
Purification method	Centrifugation or Vacuum
Column binding capacity	Up to 50ug
DNA fragment size	100 bp – 15 kb
Time to process 1 sample	Less than 10 min
Application	Sanger Sequencing NGS Sequencing DNA labeling Cloning

Products list
Cat. no.	BNROP-0020
Scale	200 prep/box
Price	120,000

NICSROprep™ Total DNA Extraction S & V Kit

Chaotropic agent를 이용한 lysis를 기본으로, 박테리아에서부터 고등생물은 물론 정제가 용이 하지 않은 whole blood에서도 total DNA를 추출할수 있도록 고안된 제품이다. 특히 일반적인 genomic DNA외에도 mitochondrial DNA, Chlorplast DNA와 같은 endogenous DNA와 감염된 시료로부터 viral DNA 및 Plasmid DNA와 같은 exogenous DNA의 추출까지도 폭넓게 응용할수 있다.

Key features
Column type	Silica membrane base
Column binding capacity	Up to 50 ug
Average yield	30 ug / 25 mg tissue 20 ug / 50-100 ul Whole blood 20 ug / 106-107 Cultured cells 15 ug / 107-108 Yeast / fungi 20 ug / 2-5 x 108 Bacteria
Time to process 1 sample	Less than 60 min
Application	Gene cloning PCR, real-time PCR Southern blotting Genotyping and etc.

NICSROprep™  Total RNA Kit for Cell and Tissue – 준비중

NICSROprep™  Virus RNA Kit - 준비중

NICSROprep™  ExoQuick PCR Clean-up Kit - 준비중

NICSROprep™ Plasmid DNA Miniprep S & V Kit

Alkaline lysis를 기본으로 Silica-membrane에 plasmid DNA를 흡착시키는 방식의 정제 kit로서, 기본적인 Spin 방식과 Vaccume 방식이 모두 가능하다. 높은 수율과 순도를 위해 고안된 당사 고유의 Buffer 조성과 효과적인 lysis를 위한 pH indicator 시스템을 채택 하였으며, 타사대비 DNA binding capacity가 높은 silica-membrane을 활용하고 합리적인 가격을 갖추고 있는 것이 장점이다.

Key features
Column type	Silica membrane base
Column recovery yield	Up to 50 ug
Average yield from 3ml culture	Up to 20 ug
Time to process 1 sample	Less than 20 min
Lysis system	Modified alkaline lysis
DNA fragment size	100 bp – 15 kb
Application	Gene cloning PCR Restriction enzyme digestion Sequencing Transformation / Transfection

NICSROgene™ BN-Taq DNA Polymerase

제품 개요

Thermus aquaticus 유래 DNA polymerase를 E.coli에서 발현/고순도 정제한 재조합 효소로서 Routine PCR에 적합합니다.

제품 응용

General PCR, TA cloning, Colony PCR, TaqMan PCR

NICSROgene™ BX-Taq DNA Polymerase

제품 개요

• - Robust amplification (Upto 20kb)
• - Mixture of Taq DNA polymerase and Pfu DNA Pol.
• - Higher yield and processivity
• - 5’→3’ polymerase/ exonuclease activity
• - 3’→5’ proofreading exonuclease activity
• - Contain a mixture of blunt ends and ‘A’ 3’ overhang
• - 5x Enhancer buffer supplied

제품 응용

• - High performance DNA amplification
• - Long PCR
• - PCR amplification of difficult template
•       (High GC% or stably secondary structure)
• - Primer extension for labeling

BX-Taq DNA polymerase is a mixture of Taq DNA polymerase and Pfu DNA polymerase. It is designed to synergize amplification speed, amplification yield of Taq DNA polymerase and amplification length, accuracy of Pfu DNA polymerase. Thus, BX-Taq DNA polymerase is more accurate than conventional Taq DNA polymerase and can amplify longer PCR products (upto 20kb) with higher efficiency. The 5x Enhancer buffer included in the product can be used to amplify PCR amplified regions with high GC content or a complex secondary structure.

NICSROgene™ 2x BX-Taq Master Mix

제품 개요

재조합 Taq DNA polymerase와 Pfu DNA polymerase가 최상의 비율로 혼합된 제품으로서, 20kb 이하의 long size amplification이 가능하고, 높은 PCR efficiency와 fidelity를 보여줌으로써 높은 정확도와 긴 target이 요구되는 PCR에 적합한 고성능 제품입니다.

제품 응용

High fidelity PCR, Long PCR, High productivity

NICSRO-gene™ Fusion Pfu DNA Polymerase

제품 개요

• NICSROgene™ Fusion Pfu-Taq DNA Polymerase는 Pyrococus furiosus 유래 DNA Polymerase를 E.coli에서 발현한 제품입니다.
  
  본 제품은 고순도의 정제된 Thermostable 재조합 단백질 효소로서 3' → 5' exonuclease (Proofreading) 활성을 가지고 있어서 DNA 증폭 시 낮은 에러율(Error rate)과 Nonspecific Band의 발생이 적고 보다 정확한 PCR 증폭이 가능합니다.
  
  NICSROgene™ Fusion Pfu-Taq DNA Polymerase는 뛰어난 속도와 High fidelity의 제품으로 Blunt-end PCR Cloning 또는 높은 특이성과 정확성이 요구되는 실험에 적합합니다.

Target Gene의 Size별 Amplification Test

Template : λDNA (10ng/ul), 1Kb DNA Ladder
PCR condition : Annealing Temp. 60 ℃,
Extension Temp. 72 ℃ - 35 Cycles

PCR 진행 속도 ( Processivity ) Test

Template : λDNA (10ng/ul), 1Kb DNA Ladder
PCR condition : Annealing Temp. 60 ℃,
Extension Temp. 72 ℃ 3,4,5,6,7,15 sec/kb - 35 Cycles

NICSROgene™ 2x Fast SYBR Green Master Mix Series

제품 개요

• NICSROgene™ 2x Fast SYBR Green Master Mix 는 Real-time PCR을 간편하게 수행할 수 있도록 제조된 2X Ready-to-use Master Mix입니다. Quantitative PCR(qPCR)을 하기 위한 Hot start DNA polymerase, dNTP, Optimized buffer 및 SYBR Green fluorescent dye가 모두 혼합되어 있어서 Primers와 Templates만 따로 넣고 실험을 진행하시면 됩니다.
• NICSROgene™ 2x Fast SYBR Green Master Mix는 높은 특이도와 민감도를 보유한 제품으로 다양한 장비에 Fast PCR의 프로그램을 적용할 수 있도록 호환성을 확대하였으며, 낮은 Background와 재현성으로 최상의 PCR 결과를 제공합니다.

• Reference dye에 따른 2가지의 제품으로 구성
  - 2x Fast SYBR Green Master Mix (with ROX) or 2x Fast SYBR Green Master Mix (no ROX)
• 경제적인 가격, 높은 민감도와 뛰어난 재현성
• Hot Start 를 이용한 빠르고 정확한 Amplification
• Fast PCR Program 모드 - 20초 / 2분 / 5분 / 10분 단위로 Set up이 가능 (Initial activation time)
• High Sensitivity and Stability (- 20℃에서 약 2년간 안정합니다)
• NICSROgene™ 2x Fast SYBR Green Master Mix 모든 Real time PCR 기기에 사용 가능합니다.

• Gene Expression
• Detection of Pathogen and Mutation
• Quantitative real-time PCR and Two-step real-time PCR

• PCR Amplicon Size : 80-150bp
• TM 값 : 약 60℃
• Primer 길이 : 17-25 mer
• Sequence
  - 약 45-55% 정도의 GC 비율을 권장합니다.
  - Palindrome sequence 또는 High GC / AT content는 피하시기 바랍니다.
  - 3’말단에 G 또는 C가 있는 염기서열을 권장합니다.
  - Primer의 특이성은 BLAST Search를 통해서 확인하시기 바랍니다.
  

•  
• Hot start duration을 분석한 결과
• Initial activation이 비교적 짧은 2분과 5분 그리고 10분과 비교했을 때 상이함이 없이 동일한 높은 효율을 보입니다.

• ✓ Recommended amount of template : 80 picogram~50 nano gram gDNA, 100 femto gram~100 nano gram cDNA, 102 – 108 plasmid molecules
• ✓ Final template, PCR Primer 농도는 각 조건에 따라 달라질 수 있습니다.

• Fast Program을 사용시 필요에 따라 qPCR reaction의 조건을 optimization 하시기 바랍니다. Fast Program의 조건이 맞지 않을 경우에는 Standard Program으로 설정하시기 바랍니다.

◈ Fast PCR Program

◈ Standard PCR Program

• NICSROgene™ 2x Fast SYBR Green Master Mix 는 다양한 Real-time 기기와 호환 되도록 설계되어 있습니다.
  (아래의 표를 참고 하시기 바랍니다.)

• ○ : 사용중인 Real-time 기기와 호환됨
• △ : 프로그램 설정 시 Off-Passive dye를 세팅하시기 바랍니다.
• * 대부분의 Real-time PCR Instrument는 각 제조사에서 판매하는 Master mix와 호환되도록 설계되어 있습니다. 타사의 Master Mix를 사용하게 되면 ROX dye의 다양한 농도와 사용 기기의 Master mix의 Setting의 문제가 발생하게 됩니다. 따라서 Default 값으로 설정하기 위해서 기기에 따른 Adjustment가 필요합니다.

• NICSROgene™ 2x Fast SYBR Green Master Mix는 ROX Reference Dye가 포함된 제품과 포함되어 있지 않은 제품으로 제공됩니다. ROX Dye는 Real time PCR의 결과값에는 영향을 미치지 않습니다. Real time PCR을 진행하는 동안에 Pipetting의 에러, Volume의 변화, 장비에 의한 Noise현상과 같이 Well간에서 검출되는 형광 시그널을 보정하기 위하여 ROX Reference Dye를 사용하게 됩니다.

NICSROgene™ Reverse Transcription Kit

제품 개요

• NICSROgene™ Reverse Transcription Kit는 고품질의 First strand cDNA를 편리하고 효율적으로 합성하는데 사용되는 제품입니다. 이 키트에 포함된 Reverse Transcriptase는 M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus) 로부터 재 조합된 Thermostable RNase H- 역전사효소로서 최적의 활성을 보이는 약 37~55℃에서 cDNA의 합성이 가능합니다.
• RNase A, RNase B, RNase C의 활성을 억제하는 RNase Inhibitor가 포함되어 있으며 또한 Oligo(dT)20와 Random hexamer가 함께 제공되므로 Poly(A) tailed mRNA 또는 Total RNA에서 cDNA의 합성을 쉽게 할 수 있도록 최적화 되어 있습니다.

• High Processivity & Yield
• cDNA 합성 8kb까지 가능
• Oligo(dT)20 또는 Random hexamer가 구성품으로 들어 있어서 선택적으로 사용이 가능
• RNA의 2차 구제의 형성을 억제
• Thermostable
• First Strand cDNA가 합성 시 50 ℃까지 온도를 설정하여 Incubation
• Reverse Transcription에 관련된 모든 Components를 제공

• Total RNA 또는 mRNA로부터 First Strand cDNA 합성
• 2 Step RT-PCR
• Gene Expression Analysis
• Quantitative RT-PCR
• cDNA Library 제작

1. Denature : Mixture A의 조건

2. First Strand cDNA Buffer : Mixture B의 조건

3. First Strand cDNA의 합성

• * Random Hexamer의 경우, 25℃에서 약 10분간 추가로 Incubation 하는 것을 권장합니다.

4. Termination : 85℃에서 5분 Incubation (Keep at 4 ℃)

• - PCR Reaction을 곧바로 진행하시거나 cDNA를 보관하시려면 반드시 -20℃에 저장하시기 바랍니다.

Recommended PCR Condition

Recommended PCR Program

NICSROgene™ 2x One step RT-PCR Kit

제품 개요

• NICSROgene™ 2x One step RT-PCR Kit는 RT-PCR에 필요한 재조합 Taq DNA Polymerase, Recombinant reverse transcriptase, dNTP, Optimized buffer, Mg2+, Enzyme stabilizer의 모든 성분이 Single tube에 최상의 비율로 혼합된 Ready-to-use 2x PreMix 제품입니다.
• NICSROgene™ 2x One step RT-PCR Kit는 first strand generation cDNA합성과 Specific Target RNA( Total RNA 또는 mRNA)의 PCR 증폭을 한번에 실행할 수 있도록 제조된 One step RT-PCR Premix입니다. 본 제품은 발현량이 아주 적은 미량의 Target RNA를 증폭하고 분석을 위하여 cDNA 합성과 높은 정확도와 특이도를 바탕으로 최적의 PCR을 가능할 수 있도록 합니다.

• High Sensitivity and Yield
• High Reproducibility
• Reduced RNase H Ribonuclease Activity
• High Throughput
• Low Copy Transcripts Amplification

• RNA Virus Study
• RNA Expression and Detection
• Multiplex RT-PCR

• RNA template는 마지막 단계에서 넣는 것을 권장합니다.
• 본제품에는 Sequence specific primer가 최적화 되어 있습니다.

NICSRO-Direct™ Fluorescent DNA Loading Dye

제품 개요

• NICSRO-Direct™ Fluorescent DNA Loading Dye는 실험실에서 보편적으로 사용되는 DNA 염색 시약인 Ethidium Bromide(EtBr)를 대체하는 안전한 DNA 형광 염색 Dye입니다. 6X 제품으로 DNA 샘플과 직접 섞어서 Agarose Gel에 로딩을 합니다. (1:5비율 – NICSRO-Direct™ Fluorescent DNA Loading Dye에 5ul의 샘플을 혼합하여 사용)
• NICSRO-Direct™ Fluorescent DNA Loading Dye는 형광염료가 포함되어 있는 제품으로서 독성이 매우 강한 EtBr을 안정적으로 대체할 수 있으며, 높은 민감도와 해상도를 보입니다. 본 제품에는 Loading dye가 포함되어 있기 때문에 추가적으로 loading dye를 넣을 필요가 없습니다.
• 샘플과 함께 Direct Loading하기 때문에 EtBr방식에 비해 Background가 현저히 낮습니다. NICSRO-Direct™ Fluorescent DNA Loading Dye 는 UV transilluminator 또는 Blue Light LED illuminator 에서 모두 사용이 가능합니다.

• EtBr을 대체하는 안전한 시약으로 샘플에 Direct Loading
• UV transilluminator 또는 Blue Light LED illuminator에 모두 적용이 가능함
• Loading dye 또는 별도의 시약을 추가할 필요가 없음
• EtBr방식에 비해 Background가 낮음
• Non-carcinogenic and No toxicity

EtBr과의 비교 테스트 결과
NICSRO-Direct™		EtBr
[NICSRO-Direct™ Fluorescent DNA Loading Dye와EtBr 비교 테스트] 1% Agarose Gel in TAE Buffer에 100bp DNA Ladder를 각 Lane에 1:5의 비율로 로딩 / EtBr 첨가된 Gel에 5ul의 DNA Ladder를 각 Lane에 로딩

• 1:5의 비율로 바로 Loading
  (1ul NICSRO-Direct™ Fluorescent DNA Loading Dye + 5ul DNA Sample)
• DNA 형광 염료는 빛에 취약하므로 직사광선을 피하시기 바랍니다.

• 1. Agarose Gel을 준비합니다.
• 2. NICSRO-Direct™ Fluorescent DNA Loading Dye 1ul와 DNA Sample 5ul와 함께 혼합합니다.
• 3. Agarose Gel에 바로 Loading합니다.
• 4. 전기 영동이 끝나면, UV transilluminator 또는 Blue Light LED illuminator에 올려놓고 Band를 확인합니다.

• 1:5의 혼합 비율을 지키지 않고 별도로 희석해서 사용하시지 마세요.
• 형광 염료는 빛에 취약하므로 반드시 차광 된 상태에 보관하세요.
• EtBr 방식 또는 Post Staining으로 DNA Band를 확인 하시려면 관련 된 다른 상품을 선택하시기 바랍니다.
  - NICSROgreen™ Clearview DNA Safe Stain : UV 전용- Blue Light LED도 가능
  - NICSROgreen™ Clearview DNA Safe Gold Stain : Blue Light/ Blue Green LED 전용 - UV도 가능

NICSROgreen™ Clearview Safe Stain (20,000X)

제품 설명(Description)

• NICSROgreen™ Clearview Safe Stain(20,000X)은 Agarose Gel에서 핵산을 검출하기 위한 제품으로 기존의 실험실에서 보편적으로 사용되는 DNA용 염색 시약인 Ethidium Bromide(EtBr)를 대체하는 안전한 DNA 염색 시약입니다. NICSROgreen™ Clearview Safe Stain(20,000X)은 EtBr보다 더 민감하며 높은 해상도로 확인할 수 있습니다. DNA 또는 RNA의 사이에 결합하여 270nm과 295nm의 두 파장대에서 녹색 형광의 높은 Excitation Peak 형성합니다. DNA에 결합된 530nm의 형광 Emission은 EtBr과 비슷하나 482nm에서 또 하나의 강한 Excitation Peak를 보입니다. 본 제품은 EtBr의 대체 시약으로 UV 또는 LED를 사용하여 DNA와 RNA를 안전하게 visualization 하기 위한 고감도의 녹색 형광염료입니다.
• NICSROgreen™ Clearview Safe Stain(20,000X)은 UV와 LED에서 모두 사용이 가능하지만 UV Transilluminator에서 사용하기에 최적화된 제품입니다. Agarose Gel에 넣어서 EtBr을 대용으로 사용을 하며 Post staining의 방법으로 사용도 가능합니다.

• Non-Toxic의 비 발암성 형광 물질
• Low Background Signal
• High Sensitivity, 0.2ng of DNA or 1ng of total RNA
• Precast Agarose Gel or Post Staining 모두 사용이 가능
• UV Transilluminator에 최적화 – LED에서도 선명하게 확인 가능

• Agarose gel상에서 DNA 또는 RNA를 안전하게 Visualization
• 독성물질의 EtBr을 완벽하게 제거

• A : NICSROgreen™ Clearview Safe Stain (Total 100ml Agarose + 6ul Clearview)
• B : B사 DNA Stain (Total 100ml Agarose + 6ul B사 DNA stain)
• * NICSROgene™ 1KB DNA Ladder를 각 Well에 7ul로 Loading하여 Test를 실시함
• 

• Precasting(In-Gel Staining)

• 100ml의 Agarose gel solution을 준비합니다. Gel의 농도는 약0.8-3.0%정도로 하시기 바랍니다. Agarose가 끓으면 Powder의 입자가 떠다니지 않도록 충분히 가열해주세요.
• 5~7ul의 NICSROgreen™ Clearview Safe Stain를 Agarose Gel에 혼합해주세요.
• 겔 트레이에 Agarose Gel Solution을 붓고 굳을때까지 기다립니다.
• Gel이 굳으면 Sample을 Loading하고 전기영동을 합니다.
• UV 또는 Blue Light LED에서 밴드를 확인합니다.

• Post-Staining

• NICSROgreen™ Clearview Safe Stain은 약 2-3번 정도 재사용이 가능합니다. 실온에서 차광 된 곳에 약 1주일간 보관이 가능합니다.
• 100ml Buffer에 약 10-25ul를 추가합니다.
• Staining time은 약 5-60분으로 권장합니다만, 최적의 시간과 사용량은 Agarose Gel의 두께와 농도에 따라 다르므로 Optimal Condition은 실험을 통하여 확인하시기 바랍니다.

• 1ml의 NICSROgreen™ Clearview Safe Stain은 약 14-20L의 Agarose Gel에 사용할 수 있습니다.
• 본 제품은 피부나 눈에 자극을 일으킬 수 있으므로 실험을 수행하실 때 장갑을 꼭 착용하시기 바랍니다.
• 형광 염료이므로 빛에 취약합니다. 직사광선을 피하시고 꼭 차광 된 Amber vial에 보관하여 사용하시기 바랍니다.

NICSRO® DNA Ladder Series - A Type

Product Name	NICSROgene™ 100 bp+3K DNA Ladder	NICSROgene™ 1KB (0.25-10 kb) DNA Ladder	NICSROgene™ 1KB Plus(0.1-10 kb) DNA Ladder
Catalogue No.	BNROP-0001	BNROP-0034	BNROP-0002
Size range (bp)	3kb ~ 100bp	10kb ~ 250bp	10kb ~ 100bp
Number of bands	12	13	19

NICSRO® DNA Ladder Series - B Type

Product Name	NICSROgene™ 1KB DNA Ladder	NICSROgene™ 100bp DNA Ladder	NICSROgene™ 100bp step DNA Ladder
Catalogue No.	BNROP-0003	BNROP-0004	BNROP-0005
Size range (bp)	10kb ~ 100bp	3kb ~ 100bp	3kb ~ 100bp
Number of bands	16	11	13

NICSRO-Direct™ Fluoro DNA Ladder Series - A Type

NICSRO-Direct™ Fluoro DNA Ladder Series - B Type

NICSROview™ 3-color Protein Markers

제품 개요

NICSROview™ 3-color Protein Markers는 3-Color Pre-stained Protein Size Marker로서 정제된 재조합 단백질로 제조된 Ready-to-use 형태의 제품입니다.

SDS-PAGE 또는 Western blotting 전기 영동을 이용하여 단백질의 크기와 이동을 쉽고 간편하게 확인할 수 있으며 Nylon, Nitrocellulose 또는 PVDF Membrane에서 확인이 가능합니다. 총 12-3개 pre-stained 단백질로 구성되어 적은 용량으로 뚜렷하고 선명한 밴드를 식별할 수 있습니다

Migration Patterns

사용방법

Mini Gel : 3-5 ㎕ Loading (Recommended)

General Western Blotting Transfer : 1.5 ㎕ -2.5 ㎕를 Loading

보관 및 주의사항

4 ℃ : 3개월 / -20℃ : 2-3년간 안정적으로 보관이 가능

반복적인 Freeze / Thaw는 제품의 성능을 저하시킵니다

Western Blot Chemiluminescent Substrates

Pre-cast gels

NICSRO-PAGE™ 4-15% Tris-Glycine Precast Mini Gel

제품 개요

NICSRO-PAGE™ Tris-Glycine Precast Gel은 Tri-Glycine Buffer System의 SDS-PAGE Running을 위한 Ready-to-use형태의 Acrylamide gel입니다. 새로운 Formula로 제조된 NICSRO-PAGE™ Tris-Glycine Precast Gel은 기존에 사용중인 Laemmli Tri-HCL Gel방법에 비해 훨씬 빠르고 더욱더 향상된 Band Separation을 확인하실 수 있습니다.

또한 냉장에서 약 1년간 안정적으로 보관할 수 있으며 Laemmli Tri-HCL방법으로 SDS-PAGE Gel 사용하시면 본제품으로 바로 호환이 가능합니다.

NICSRO-PAGE™ Tris-Glycine Precast Gel은 12 well 또는 15 well type의 4-15%의 gradient Polyacrylamide로 구성되어 있으며 Western blotting에서 가장 범용적으로 많이 사용하는 10 x 8.3cm의 Mini Gel에 적용이 가능하도록 설계되었습니다.

NICSRO-PAGE™ Tris-Glycine Precast Gel은 Bio-Rad® 또는 이와 유사한 Electrophoresis시스템을 사용중인 모든 제품에 호환 가능합니다.

보관 및 주의 사항

• 2-8 ℃ 에서 약 1년간 보관 가능
• Do not freeze – 절대로 냉동 보관 하시면 안됩니다.
• 냉장 상태로 보관하지만, 냉장고의 온도가 많이 낮을 경우에는 Precast Gel이 얼리게 됩니다. 이로 인하여 제품의 Quality가 저하되거나 제품을 사용할 수 없는 상태가 되므로 반드시 주의 하시기 바랍니다.

사용 방법(Gel Running)

• 1. Gel에 꽂힌 Comb과 테이프를 제거합니다.
• 2. Cathode Chamber에는 1X Running Buffer를 이용합니다.
• 3. Sample을 Loading하기전에 Well을 가볍게 헹굽니다.
• 4. Voltage는 200V에서 한번 Running을 시킨 다음 Voltage와 Running time을 최적의 조건으로 맞추시기 바랍니다. (Optional)
• 5. Voltage는 최소한 100V 이상으로 설정하시기 바랍니다.

샘플 절차(Sample Loading)

• 1. NICSRO-PAGE™ Tris-Glycine Precast Gel의 포장지를 뜯어서 Open합니다.
• 2. ddH₂O로 가볍게 Gel Cassette를 헹굽니다.
• 3. Gel이 눌러지거나 찌그러지지 않도록 조심해서 Comb과 테이프를 제거합니다.
• 4. NICSRO-PAGE™ Tris-Glycine Precast Gel을 전기영동 장치에 장착합니다.
• 5. Gel에 혹시라도 남아 있을 Storage Buffer를 제거하기 위해 Running Buffer로 가볍게 씻어 주시기 바랍니다.
• 6. Sample을 Loading하기 전에 Running Buffer를 Well에 넣어줍니다.
• 7. Sample과 Protein Marker를 Well에 Loading 합니다.
• 8. Chamber의 내 외부에 Running Buffer를 Gel의 Well이 완벽히 덮여지도록 상한선까지 가득 채웁니다.

NICSRO-PAGE™ Gel Migration Chart

• 1. Voltage는 100V이상을 설정하시기 바랍니다.
• 2. 200V부터 시작해서 최적의 조건의 Voltage와 Running time을 확인하시기 바랍니다.
• 3. Running time은 Gel의 퍼센트, Buffer, 온도 그리고 어떤 Power supply를 사용하는지에 따라 다릅니다.
• 4. Voltage를 높게 설정하시려면 Chamber의 Running Buffer를 새롭게 갈아주시기 바랍니다.

• Gel Cassette를 분리하여 전기영동을 한 다음 Gel이 마르지 않도록 주의하시기 바랍니다.
• 1. Cassette Opener를 Gel Cassette의 모서리쪽에 넣습니다.
• 2. Opener를 이용하여 Cassette를 돌려가면서 양면의 Plate를 각각 분리합니다.
• 3. Cassette위쪽에서부터 뜯으면서 천천히 뜯어냅니다.
• 4. Gel의 아래쪽 또는 위쪽에서 조심스럽게 떼어냅니다.
• 5. Cassette를 떼어낼 때 Gel이 비스듬하게 벗겨지지 않도록 조심하시기 바랍니다. 모서리쪽에서 Gel을 대각선 방향으로 벗겨내지 마세요. Gel이 찢어지거나 뭉쳐질 수도 있습니다.
• 6. Gel이 강하게 붙어서 분리가 되지 않으면 물을 사용하여 분리하시기 바랍니다.

• 가장 보편적인 방법으로 Coomassie Blue Staining Dye 또는 Sliver stain을 이용하여 Gel을 염색합니다.
  바이오닉스에서 제조 개발한 NICSRO-STAIN™ Smart-Blue Protein Staining Solution을 사용하면 Fixation, Washing 또는 De-staining의 과정이 없이
  30분만에 탁월한 민감도로 단백질을 확인할 수 있습니다. (Cat. no : BNROW-0017)

• 1. NICSRO-PAGE™ Gel을 조심스럽게 떼어 냅니다.
• 2. Transfer를 하기전에 미리 Filter Paper와 Membrane을 Transfer buffer에 미리 담가 둡니다.
• 3. PVDF Membrane의 경우는 Transfer Membrane에 먼저 적셔주기 전에 Methanol에 몇 분간 넣고 Activation을 진행합니다.
• 4. Transfer Cassette에 Filter Paper, Membrane 스폰지와 Gel을 함께 Setting한 다음 Transfer모듈에 장착합니다.
• 5. Cooling된 Transfer Buffer를 상한선까지 채워줍니다.
• 6. Voltage를 100V에 설정하고 낮은 온도에서 약 90분간 Transfer를 합니다.
• 7. Transfer가 완료되면 Pre-stained protein Marker는 보여야 정상이며 Transfer가 잘되었는지 확인을 위해서는 Blocking의 단계로 넘어가기 전에 Ponceau S로 Staining을 하여 확인하시기 바랍니다.

• 2x Sample Buffer (Reducing agent)
• 62.5 mM Tris-HCl pH 6.8, 2% SDS, 25% (v/v) glycerol, 0.01%
• bromophenol blue, 5% β-mercaptoethanol or 100 mM DTT
• 10X Tris-Glycine running buffer
• 30.0 g Tris base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS. 1 L with ddH₂O
• 1X running buffer
• Dilute 100 ml 10X running buffer with 900 ml ddH₂O
• 10X transfer buffer
• 30.0 g Tris base, 144.0 g Glycine. 1 L with ddH₂O
• 1X transfer buffer
• Cool 1X transfer buffer to 4°C before using. Dilute 100 ml 10X transfer buffer with 200 ml methanol and 700ml ddH₂O.
  Add SDS to 0.1% to promote transfer of high molecular weight proteins

Other reagents

NICSRO-STAIN™ Smart-Blue Protein Staining Solution

제품 개요

• NICSRO-STAIN™ Smart-Blue Protein Staining Solution은 기존의 Coomassie Blue Staining Solution의 성능을
  한층 업그레이드하여 제조된 개발된 제품으로 Fixation, Washing 또는 De-staining의 과정이 필요없이 빠르고 간편하게
  단 15-30분만에 탁월한 민감도로 단백질을 확인할 수 있습니다.
  
  본 제품은 독성이 없고 자극적인 냄새가 나지 않습니다.
  장시간 염색을 하거나 추가적인 실험 Step이 없이 Western Blot 후 Gel을 그대로 염색을 하시면 됩니다.

제품 특징

• 15-30분만에 높은 민감도로 Gel을 염색
• Fixation, Washing, De-staining이 필요 없음
• 자극적인 냄새와 독성이 없음
• 실온에서 2년 이상 안정적으로 보관이 가능
• 기존의 방법 : Coomassie Blue Staining Solution을 대체
• 미량의 단백질까지 염색이 가능

• 실험에 필요한 Gel staining Box 또는 Rocking shake를 따로 준비 하시기 바랍니다.
• 1. NICSRO-STAIN™ Smart-Blue Protein Staining Solution을 위 아래로 살짝 흔들어 줍니다.
• 2. SDS-PAGE 전기 영동이 끝나면 Gel을 Cassette에서 떼내시기 바랍니다.
• 3. 분리한 Gel을 용기에 옮기고, Gel을 적시기에 충분한 양의 NICSRO-STAIN™ Smart-Blue Protein Staining Solution을 넣어주세요.
• 4. 염색 용기를 가볍게 흔들어서 저어줍니다.
• 5. Washing이나 De-staining이 필요 없기 때문에 다른 추가적인 실험이 필요가 없이 그대로 조심스럽게 Dye solution을 제거해줍니다.
• 6. (Optional) 과도하게 많이 염색이 되었다고 판단되면, dH₂O로 가볍게 Washing 하시기 바랍니다.
• 7. 염색된 밴드를 확인하시기 바랍니다.

• 1. 단백질 밴드의 Visibility를 늘이기 위해서는 Over night을 해도 상관없습니다.
• 2. Gel의 두께가 1mm 이상일 경우에는 Incubation time을 늘여서 사용하시기 바랍니다.
• 3. 간혹 NICSRO-STAIN™ Smart-Blue Protein Staining Solution에 파란색의 덩어리가 생길 수도 있습니다. dH₂O에 쉽게 용해될 수 있으므로 실험에 영향을 전혀 미치지 않습니다.