(E.coli Expression) 재조합 단백질 서비스

Protein expression service에 대한 안내 부탁드립니다.

expression service는 expression pre-test와 purification service로 나눠지게 됩니다. Pre-test 결과 발현수준이 낮거나, insoluble form으로 발현되면 purification을 권장하지 않습니다. 단, 소량의 단백질이라도 원하실 경우 purification service의 진행은 가능합니다. 소요기간은 각 단계별로 2주 가량 소요되며, 발현수준이 낮은 경우 다소 지연될 수 있습니다.. 의뢰 당시 대량의 단백질을 얻고자 할 경우는 1 liter당 40만원의 추가비용이 발생합니다.

서비스 의뢰 시 준비해야 할 것은 어떤 것들이 있습니까?

정제를 원하는 유전자가 cloning되어있는 plasmid DNA(1ug 이상)와 clone에 대한 기본적인 정보(vector, tag 종류, 유전자 정보)를 제공해주시면 바로 진행 가능합니다.

진행 완료 후 납품 시 어떤 것들을 받을 수 있습니까?

정제된 단백질과 실험 관련 data가 제공됩니다.

Pre-test 진행조건이 어떻게 되는지 알고 싶습니다.

배양조건은 0.1mM, 1.0mM의 IPTG 농도와 15℃, 26℃, 37℃의 온도조건을 조합하여 총 6가지의 조건에서 발현수준 및 solubility를 측정하게 됩니다. 이를 통하여 발현 및 정제에 가장 유리한 조건을 수립하게 됩니다.

Pre-test없이 purification만 진행하고 싶습니다.

일반적인 의뢰건의 경우 pre-test를 당사에서 진행하지만 조건이 잡혀있는 sample의 경우 purification만 따로 의뢰하실 수 있고, 이 경우에는 induction condition 및 solubility test에 대한 data를 제공해주셔야 진행이 가능합니다. 또한, 보내주신 조건대로 진행 후에 단백질발현수준 및 solubility가 낮은 경우 단백질의 정제량은 보장해드리지 못합니다.

Refolding service 의뢰 시 이에 대한 보장이 가능한가요?

발현확인결과 발현된 단백질이 모두 insoluble fraction에서 확인되는 경우 refolding을 진행할 수 있습니다. 고농도의 Urea로 단백질을 denaturation하여 녹인 후 순차적으로 Urea의 농도를 낮춰가면서 refolding을 진행합니다. 하지만 이 과정을 통해 모든 단백질이 충분히 refolding이 이루어졌다고 할 수는 없습니다. 따라서 이 단백질에 대한 활성도는 보장해드릴 수 없습니다.

Tag removal 과정은 어떤 식으로 진행됩니까?

일반적으로 fusion 단백질(GST, MBP, Thioredoxin, IF2등)의 제거는 linker sequence에 있는 Thrombin, FactorXa, Enterokinasecleavage site를 이용하게 됩니다. 정확한 clone의 정보를 제공해주셔야 tag removal 과정이 가능합니다.

Endotoxin removal 과정은 어떤 식으로 진행됩니까?

E. coli에서 유래한 Endotoxin은 정제 진행과정에서 endotoxin removal buffer를 이용하여 제거하게 되며, 충분히 제거되지 않은 경우 정제산물에 대하여 추가적인 endotoxin removal step을 진행하게 됩니다. 이 결과 100EU/mg보다 낮은 수준의 EU값을 확인 후 납품하고 있습니다.

Western blotting의 의뢰 시 특이사항은 무엇인가요?

당사에서 Western blotting 진행 시 10well PAGE gel을 사용합니다. 따라서 size marker와 control lane을 제외한 8개 sample을 하나의 gel에 loading이 가능하며, 한 건의 의뢰 시 sample의 개수는 최대 8개까지 진행이 가능합니다. [ex) 9개 이상 시 : 2건 / 17개 이상 시 : 3건 등..]

진행 완료 메일을 받았는데 납품이 이뤄지지 않고 있습니다.

메일을 보내드린 후 답신을 받아야만 납품이 진행됩니다. 정확히 주문하신 고객에게 전달하는 것이 원칙이기 때문에 답변을 주시면 원하시는 날짜에 배송하여 드립니다. 답신을 얻지 못하는 경우 그만큼 납품이 지연될 수 있으니 빠른 답신 부탁 드립니다.

ELISA 서비스

실험전 모든 시약과 시험 샘플을 실온으로 평형(워밍업) 시켜야하는 이유는 무엇입니까?

온도는 ELISA 결합 반응에서 중요한 요소입니다. 모든 시료가 일정한 온도에서 반응하기 위해서는 실험 전에 모든 시약과 시험 샘플을 상온으로 평형시키는 것이 중요합니다. 온도 역동 반응의 차이로 인한 ELISA 검사 결과의 부정확성을 피하기 위해서입니다. 일반적으로 20-30분 정도의 시간을 두고 평형시킵니다.

왜 마이크로 플레이트 리더를 읽을 때 이중 파장을 사용해야합니까?

ELISA 실험은 단일 파장 검출시 측정 간섭 (시료 농도, 간섭 색 등)을 제거 할 수 있는 흡광도를 측정하기 위해 두 개의 파장을 사용합니다. 일반적으로 최대 파장이 기준 파장으로 사용됩니다. 기준 파장에서는, 검출 대상의 흡광도가 가장 작고, 검출 파장의 흡광도 값과 기준 파장의 흡광도 값의 차이가 비특이적 흡수를 제거 할 수 있습니다. 따라서 이중 파장 측정은 지문과 불순물을 최대한 제거 할 수 있습니다. 실험 데이터의 정확성을 보장하기 위해 불투명 재질의 마이크로 플레이트 리더를 읽음으로써 발생하는 오류입니다.