ExoSparkler 시리즈는 Exosomal membrane과 Protein 염색을 통하여 labeled exosome을 이미지로 확인할 수 있습니다. Dojindo의 ExoSparkler제품을 사용하면 염색 시약의 Extracellular aggregation이 없으며 labeled exosome을 간편하고 쉽게 Purification 할 수 있습니다. 또한 ExoSpakler(Green, Red and Deep Red)에 의해 염색된 Exosome의 손상이나 Particle의 수와 크기에 변화가 없는 장점이 있습니다.

ROS 측정을 위해 일반적으로 DCFH-DA가 많이 사용되고 있습니다. 하지만 기존의 제품은 Membrane에 흡수되는 침투력이 떨어지는것 뿐만 아니라, 광산화(Photo-Oxidation)로 인하여 형광 시그널이 현저히 떨어지게 됩니다. 게다가 High background 문제가 자주 발생하므로 제품의 효율성이 떨어 집니다. Dojindo의 제품은 이러한 문제점을 보완하여 2가지 Type의 제품을 공급하고 있습니다. ROS Assay kit - Highly Sensitive DCFH-DA는 감도와 Membrane permeability를 업그레이드하여 타사에 비해 Background가 훨씬 낮습니다. ROS Assay kit - Photo-Oxidation Resistant DCFH-DA는 염색을 한 후 관찰하면서 Photo-oxidation 현상이 발생하는 한계점을 개선하여 더욱 선명하고 깨끗하게 ROS 검출할 수 있는 광내성( Photo-Oxidation Resistant)의 DCFH-DA 제품입니다.

Liperfluo는 ferroptosis 연구중에서 Lipid Peroxidation을 모니터링을 할 수 있는 제품으로 사용되고 있습니다. Liperfluo는 Lipid Peroxide를 특이적 으로 감지할 수 있는 유일한 Chemical Compound 으로서 산화 되었을 때 Liperfluo 형광 파장은 Ex 524nm / Em 535nm 입니다. 산화형의 Liperfluo는 수용성으로 거의 형광을 나타내지 않고 Cell Membrane과 같은 Lipophilic한 곳에서 강력한 형광을 나타냅니다. Photo-damage와 Auto-fluorescence 를 최소화하며 형광 현미경 또는 Flow cytometry를 통해 살아있는 세포의 Lipid Peroxide의 이미징이 가능합니다.

Free ion은 Ferrous(이온화) ion (Fe²⁺ )과 Ferric ion (Fe³⁺ )의 Stable Redox State로 이루어져 있습니다. Fe²⁺ 는 수용성으로 Fe²⁺ 의 transport의 형태로 세포내에 흔히 존재합니다. Fe³⁺ 에 비해 Fe²⁺ 의 역할이 더 중요하기 때문에 이에 대한 학문적 연구가 많이 이루어지고 있습니다. Dojindo는 Novel Fluorescent Probe를 이용하여 Intracellular Fe²⁺를 살아있는 Cell에서 확인할 수 있는 제품으로 FerroOrange를 공급하고 있습니다.

살아 있는 세포에서 Mitochondria를 염색하게 되면, Fluorescence Dye의 Intensity, Retention이 감소하거나 Cell Cytotoxicity가 발생하는 문제점이 자주 나타납니다. Dojindo의 MitoBright LT Series는 이러한 문제점을 보완하여 장시간 세포내에서 Fluorescence Dye가 유지되며 Serum-containg media에서도 선명한 해상도로 Imaging할 수 있습니다.

JC-1은 Mitochondrial membrane potential을 관찰할 때 널리 사용되는 시약으로, Mitochondrial membrane potential에 따라 Green(530nm)에서 Red(590nm)로 형광이 변화됩니다. JC-1을 사용한 세포 내 Mitochondria의 activity가 낮아지면 Red fluorescent J-aggregate의 형성이 억제되어, Red/Green fluorescence intensity의 비율이 감소하게 되고, 이를 이용하여 Mitochondrial membrane potential의 감소 정도를 측정할 수 있습니다. Assay 과정이 매우 간편하며, JC-1의 Dissolve가 쉽고, Flow cytometry, Microscope, Plate reader에서 모두 측정 가능합니다.

Mitochondrial membrane potential을 측정하기 위해 JC-1 dye, TMRE, TMRM이 널리 사용되고 있습니다. 하지만 이 Dye들은 Aldehyde Fixation 후에 낮은 Photostability 문제와 Retention 감소를 보인다는 한계점을 가지고 있습니다. MT-1 MitoMP Detection Kit는 이러한 점을 개선하여 개발된 제품으로 Background 낮으며 높은 감도로 Assay를 진행하는 동안 세포의 Viability를 유지할 수 있습니다. 또한, 세포의 Fixation을 안정적으로 할 수 있기 때문에 고정된 세포에서 형광 손실이 없어 실험의 결과를 일정하게 얻을 수 있습니다.

MitoPeDPP는 세포 막 투과성을 지닌 Perylene 형광 Probe입니다. Triphenylphosphonium Moiety로 인하여 특이적으로 Mitochondria에만 특이적으로 위치하게 됩니다.
MitoPeDPP는 Ferropotosis 또는 Lipid Peroxidation과 관련된 실험에서 사용할 수 있습니다.
MitoPeDPP의 Detection 형광 파장은 λex 452nm/ λem 470nm으로서 살아있는 세포의 Lipophilic Peroxide를 Imaging할 수있는 제품입니다.

Singlet Oxygen은 자외선, 플라즈마, 화학 반응등 다양한 경로를 통해서 생성 될 수 있습니다.
화학적으로 활성이 높아서 많은 화합물과 반응하며 산화 작용을 하며 라디칼 반응, 산화 또는 광촉매 작용에서 다양한 생물학적 화학적으로 중요한 역할을 합니다.
특히 신체내에서의 Siglet Oxygen은 산화 스트레스와 관련된 상황에서 생성되며, 세포 손상, 염증반응, 항생제 작용과 관련될 수 있습니다.
Si-DMA는 Silicon-containing rhodamine과 anthracene moieties로 구성되어 있는 새로운 물질의 Far-red Fluorescence Probe입니다.
Si-DMA 화합물은 Anthracene Moiety에서 Endoperoxide의 형성으로 인하여 산소 활성의 분자인 Siglet Oxygen이 존재하면 형광 시그널이 17배 이상 증가합니다.
Si-DMA는 여러 ROS 중에서 Siglet Oxygen을 선택적으로 감지할 수 있는 물질입니다.
따라서 세포질로부터 발생한 Protoporphyrin IX와 5-aminolevulinic acid (5-ALA)를 이용하여 Mitochodria에서 ¹O₂의 생성을 실시간으로 Visualization할 수 있습니다.

Mitochondria는 세포내의 에너지 생성에 관여하며 세포의 생존을 위한 중요한 역할을 하는 세포 소기관중의 하나입니다.
Mitophagy는 손상되었거나 불필요한 Mitochondria를 제거하는 분해기전으로, 손상이 발행하면 Autophagosome이라는 막을 형성하고 Lysosome과 융합하여 손상된 Mitochondria 를 선택적으로 제거하는 역할을 하는것입니다.
Mitophagy는 알츠하이머 또는 파킨슨병과 연관이 되어 있으며 최근 많은 학계에서 활발하게 이에 대한 연구가 이루어지고 있습니다.
Dojindo의 Mitophagy Detection Kit는 Mtphagy Dye와 Lyso Dye로 구성되어 있습니다.
Mtphagy Dye는 처음에는 Mitochondria의 내부에 축적되어 있으면서 약하게 형광을 띕니다.
그리고 Mitodondria를 제거하는 분해기전으로 Membrane 으로 주위를 둘러싸면서 Autophagosome이 형성되고 Lysosome과 결합을하게 되면 강한 형광을 발산하게 됩니다.
이에 Mitophagy Detection Kit에 포함되어 있는 Lyso Dye를 통하여 Phagosome-Lysosome 융합이 형성되었음을 확인할 수 있습니다.

Senescence-associated β-galactosidase (SA-β-gal)는 세포 노화의 표지로 알려져 있습니다. 주로 노화된 세포에서 라이소좀의 β-galactosidase의 발현이 증가하여 나타납니다. Dojindo의 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal은 높은 감도로 SA-β-gal을 편리하게 확인 할 수 있는 제품 입니다. Endogenous β-galactosidase을 억제하는 Bafilomycin A1를 사용하여 살아있는 세포에서 SA-β-gal을 선택적으로 감지할 수 있습니다.

Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal은 세포 노화의 마커인 Senescence-associated β-galactosidase의 활성을 Microplate Assay 를 이용하여 간편하게 Detection하는 제품입니다. SPiDER-βGal을 96-well plates에 첨가함으로써, β-galactosidase의 활성을 정량화하고, 다수의 시료를 평가할 수 있습니다. Senescence Plate Assay에서 정확한 Data 값을 얻기 위해서는 Cell Count Nomalization Kit를 사용할 수 가 있습니다. Cell Count Nomalization Kit는 핵산 DNA에 결합하여 파란색의 형광을 방출하는 Nuclear Staining Dye(Hoechst 33342)와 Optimized Buffer로 구성 되어 있습니다. 이 파란색의 형광 염료를 이용하여 간단하게 측정값의 보정을 할 수 있으며 Kit에 포함된 Quenching Buffer를 사용하여 Background가 없는 형광 Signal을 확인합니다.

세포주기의 다양한 Phase는 DNA 염색이나 Flow cytometer를 사용하여 분석할 수 있습니다. Propidium iodide(PI)는 세포 주기 분석에 널리 사용되고 있지만 세포를 고정해야되고 RNase를 처리해야 하는등 많은 문제점을 가지고 있습니다. Cell Cycle Assay Solution Deep Red 와 Blue는 이러한 점을 보완한 제품으로 세포에 시약을 바로 첨가하여 사용 가능하며 PI에 비해 실험과정 간단하고, 고정된 세포와 살아있는 세포 모두에 사용 가능합니다. 2가지의 색(Deep Red, Blue)중에 원하는 색을 선택하여 사용할 수 있습니다. 세포막의 투과성이 좋고, DNA와 매우 특이적으로 반응할 수 있습니다.

γH2AX는 DNA 손상의 지표로 사용되는 특정 단백질입니다. DNA에 손상이 발생하면 H2AX 단백질이 특정 부위인 세린 139 번 residue에서 인산화 작용 을 받아 γH2AX로 변화합니다. Dojindo의 제품은 면역 형광 염색법을 이용하여 γH2AX를 쉽고 편리하게 확인할 수 있는 제품입니다. 세포 노화의 지표인 SA-β-gal과 γH2AX의 Detection을 위해 Cellular Senescence Detection Kit-SPiDER-βGal과 DNA Damage Detection Kit - γH2AX를 동시에 처리한 결과, γH2AX의 형광 Signal Intensity가 증가되었고 SA-β-gal의 활성도 향상 되었음을 확인할 수 있습니다.

Lipid droplet은 Triacylglycerol과 Cholesteryl ester로 구성되어 인화지질(monolayer)이 둘러싸인 지질 구조물입니다. LDs는 지질대사, Autophagy 및 세포 노화를 조절하는데 중요한 역할을 하고 있습니다. Lipi Series Blue / Green / Red / Deep Red는 Lipid droplets를 확인하기 위한 형광 Probe입니다. 기존에 사용하던 Fluorescent dye의 문제점을 개선하여 필터 적응성, 특이성 그리고 Retention이 증가되었으며, 좀더 확장된 Emission Color의 범위는 Multiple Staining을 위한 염료 선택을 가능하게 합니다.

Dojindo의 Lipid Droplet Assay Kit의 형광 염료는 Live Cell과 Fixed Cell 모두 사용할 수 있습니다. 기존에 사용되는 일반 시약과 비해 비교적 빠른 시간에 Assay를 수행할 수 있으며 Kit에 포함된 염료는 Microplate에 침전되지 않기 때문에 실험 결과의 재현성이 향상됩니다.

Anitbody / Protein Labeling Kit는 항체 또는 단백질에 형광 또는 효소 Tag를 부착하여 이들의 탐지, 추적, 및 분석에 사용되는 키트입니다. 단백질이나 항체에 ALP, Biotin와 같은 특정한 형광 물질이나 효소를 결합시켜 시약내의 반응을 통해 라벨링을 할 수 있는 제품으로서, 형광 Labeling은 항체 또는 단백질의 시각화와 세포 이미징, 형광 면역조직화학 등 다양한 응용 분야에 사용될 수 있습니다. 또한, 효소 Tagging은 항체 또는 단백질의 활성 분석, 바이오센서 개발 등에 활용될 수 있습니다.

SOD는 Superoxide anion(O2^–)를 과산화수소와 산소분자로 분해하는 작용을 하는 가장 중요한 항산화 효소중의 하나입니다. 포유류에서는 세포질 내 SOD는 녹색을 띠며 구리와 아연(Cu/Zn-SOD)을 포함한 두 개의 하위단위로 구성되며,미토콘드리아 및 세균성SOD는 붉은색-보라색을 띠며 망간을 포함합니다. SOD 활성 검출에 일반적으로 사이토크롬 C도 사용되지만, Superoxide anion(O2^–)의 반응성이 너무 높아 낮은 수준의 SOD 활성을 정확히 측정 하기 어렵습니다.
Dojindo의 SOD Assy Kit는 Xanthone Oxidase와 WST(Water Soluble Tetrazolium Salt)를 이용하여 샘플내에 존재하는 SOD의 활성을 편리하게 매우 높은 감도로 측정할 수 있는 제품입니다. Kit에 포함된 WST-1은 환원형의 Xanthine oxidase와 반응하지 않으므로 SOD의 Inhibition Rate를 100% 감지할 수 있습니다. Xanthine oxidase 활성과 WST-1환원은 서로 비례합니다.다시 말하자면 Xanthine oxidase 활성이 증가하면 WST-1의 환원도 증가합니다. SOD Inbibition으로 WST-1의 환원은 억제됩니다. 따라서 SOD 또는 SOD 유사물질의 IC₅₀ (50% Inhibition)을 이와 같은 원리를 이용하여 Colorimetric Method로 확인합니다.

DPPH (2, 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)은 항산화 능력을 측정하는데 널리 사용되는 화합물입니다. 즉, 항산화 물질은 DPPH와 반응하여 자유 라디칼인 DPPH를 안정화시키고 색상이 변하는데 이를 통해 항산화 능력을 평가할 수 있습니다. Kochi University의 Shimamura 연구실은 DPPH (2, 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)를 사용한 항산화 활성 평가 방법을 개발했습니다. 본 제품은 Shimamura 연구실의 보고서를 기반으로 한 Microplate Asay 제품입니다.

Malondialdehyde (MDA)은 지질 과산화의 결과물 중 하나로서, 지질이 산화될 때 생성되며 알데하이드의 일종입니다. 지질 과산화와 관련이 있으며 Free Radical 및 산화 스트레스의 결과물로서 세포내의 지질 구성 요소들이 산화될 때 형성이 되는데, 즉, Free Radical의 공격을 받아 붕괴될 때 MDA가 생성되는 것을 말합니다. 단백질 변성과 DNA 손상을 유발할 수 있으며, 이는 암, 심혈관 질환, 당뇨병 등과 관련된 다양한 질병 연구 및 생리적 과정과 연관이 있을 수 있습니다.
Dojindo의 MDA 키트는 TBARS (Tiobarbituric acid reactive substances) 방법을 사용하여 Detection하는 Kit로서 MDA와 Thiobarbituric acid의 반응으로 형성되는 MDA를 형광 또는 Colorimetric을 통해 측정하여 MDA 농도를 정량화하는 방법입니다.

GSH(Glutathione) 은 산화스트레스로부터 세포를 보호하기 위해 Free Radical 및 산화물을 제거하는 역할을 하며 산화 스트레스에 의해 발생하는 세포 손상을 방지하고 세포의 건강을 유지하는 데 중요한 역할을 합니다. GSH은 환원제로 작용하여 다양한 화학 반응에서 전자를 전달하고 산화되며, 이 과정 에서 GSSG로 변환되며, GSSG은 산화제로 작용하여 다른 화학 물질을 환원하고 그 과정에서 GSH로 생성합니다. GSH는 Glutathione 환원효소에 의해 GS-TNB로부터 재생되고, 다시 DTNB와 반응하여 TNB를 생성하여 노란색의 TNB를 통해 GSH의 농도를 412 nm 흡광도에서 O.D. 측정을 합니다.

ACE는 혈압 조절 기전 중 하나인 Renin-Angiotensin 시스템에서 작용하여 Angiotensin I을 혈관 수축제인 Angiotensin II로 변환합니다. 이 효소는 또한 항고혈압 펩타이드인 Bradykinin을 분해하여 고혈압을 유발하는 역할을 합니다. 최근에는 ACE를 차단하는 성분을 함유한 음식 및 보충제가 고혈압 예방에 사용되고 있습니다. 기존의 ACE 억제 활성 측정 방법은 합성 기질인 Hippuryl-His-Leu를 사용하지만, 이 방법은 번거롭고 잔류 에틸 아세테이트로 인해 측정 결과에 오차가 발생할 수 있습니다. ACE Inhibitory Assay Kit은 ACE 억제 활성을 측정하는 방법으로 사용되며 Multiple 샘플을 동시에 테스트할 수 는 장점이 있습니다. 또한 유해한 유기 용매를 사용할 필요가 없어 안전하고 간편하게 실험을 수행할 수 있습니다.

Lysosome은 세포 외부로부터 Endocytosis를 통해 흡수한 물질, 세포 자체의 자가포식(autophagy)으로 생성된 불필요한 구성 요소, 손상된 세포 구성 요소 등을 분해합니다. Lysosomal function을 분석 시, 단일 Dye로 Lysosomal pH와 Mass를 동시에 측정하는 것은 어려운 일입니다. Lysosomal Acidic pH Detection Kit는 pHLys Red (pH dependent)와 LysoPrime Green (pH-independent)을 포함하고 있고, 이 둘은 Lysosome에 축적되면서 작용합니다.
pHLys Red는 Acidity가 증가할수록 형광신호가 강해지고, Lysosomal disfunction으로 인해 lysosome이 중성화되면 그에 따라 형광 신호가 약화됩니다. 반면 LysoPrime Green은 Lysosome의 pH와는 상관없이 안정적인 형광신호를 제공합니다. 이 두개의 시약을 결합하여 사용하면 pH와 Lysosomal mass 를 측정할 수 있습니다.
pHLys Red는 특이성이 높고 pH 변화에 민감하여 살아있는 세포의 Lysosome의 pH를 정확하게 분석할 수 있으며, LysoPrime Green은 형광 염료의 유지력이 높고, 특히 Lysosome의 산성을 저해하는 Bafilomycin A1 처리하면 일반적인 염료는 pH의 변화에 민감하므로 Lysosome 이 산성으로 변하게 되면 형광 Signal이 감소하게 됩니다.
LysoPrime Green은 이런 문제점을 보완하여 만든 제품으로 Lysosome내에서 형광 Signal의 감소를 방지하여 더욱 선명하고 깨끗하게 Lysosome Imaging을 할 수 있습니다.

Lysosomal live cell analysis를 위해 형광 probe는 많은 제품이 널리 사용되고 있습니다. LysoPrime Deep Red - High Specificity and pH Resistance는 pH 변화에 따른 낮은 특이성과 낮은 Retention 능력은 문제점믈 개선한 것으로 높은 Specificity와 높은 Retentivity를 가지고 있어 장기간의 Imaging 실험에 적용 가능합니다.

AcidSensor Labeling Kit는 Target substance의 Endocytosis uptake Visualization에 사용할 수 있는 All-in-one kit입니다. Kit에 들어있는 NH₂와의 반응성을 지닌 AcdiSensor는 Target substance에 포함되어 있는 Amino group과 혼합되었을 때 Ester group을 이용하여 안정적인 공유결합을 형성 하고, 633nm에서 Excitation되어 녹색 또는 적색 형광으로 다중 염색이 가능합니다. 중성 조건에서는 거의 형광을 나타내지 않고, Endocytosis에 의해 Take-up 되어 산성화되면 형광을 나타냅니다. 이 제품은 Endocytosis detection dyedls ECGreeen(E296) 와는 다르게 세포 내로 유입되는 Target substance를 염색하고, Reactive amino groups를 가진 분자량 50,000이상의 샘플을 labeling할 수 있습니다.

Dojindo의 ExoIsolator Exosome Isolation Kit에 포함되어 있는 Filter holder와 Isolation filter만으로도 세포 상층액에서 Exosome을 추출할 수 있습니다.
Ultracentrifugation(UC) 방법과 동등한 회수율을 보이고, UC와는 달리 특별한 기술과 복잡한 과정 없이 Filtration 과정만으로 Exosome를 빠르게 추출 할 수 있습니다.

Cellstain-Double Staining Kit는 형광 염색을 이용하여 Live cell과 Dead cell을 동시 확인할수 있는 제품입니다. Calcein-AM은 Esterase에 의해 생성 되어 강한 녹색 형광을 띄어 살아 있는 세포만을 선택적으로 염색합니다(Ex: 490 nm, Em: 515 nm). 반면에 Propidium Iodide (PI)는 살아 있는 세포막을 침투하지 못하고 사멸된 세포의 불규칙한 영역을 통과하여 이중나선 구조의 DNA에 결합하여 붉은색 형광을 방출합니다 (Ex: 535 nm, Em: 617 nm). 두 형광 Dye는 모두 490 nm로 흡수되므로 형광 현미경을 사용하여 Live cell과 Dead cell을 동시에 모니터링할 수 있습니다.

Hydrogen peroxide 또는 Peroxidase를 기반으로 한 Enzyme Oxidation 방법은 감도가 높으며 선택성이 있으므로, 진단 분석 제품을 개발하기 위해 그동안 자주 이용되었습니다. 산화효소의 효소 반응은 H₂O₂를 생성하며 이 H₂O₂의 농도는 반응 용액의 Substrates의 농도를 나타냅니다. 따라서 H₂O₂의 양을 측정하여 Substrate의 농도를 결정할 수 있습니다.
이 H₂O₂ 양은 Oxidative Chromogenic Dye 와 Peroxidase를 이용하여 Spectrophotometer를 통해 측정됩니다. Peroxidase는 효소면역측정법 (EIA)에서 가장 일반적으로 사용되는 효소로서, Oxidative Chromogenic Dye는 Microplate Assay 뿐만 아니라 조직 슬라이드 및 Membrane 필터 염색에도 사용할 수 있습니다. Dojindo는 H₂O₂ - Peroxidase 검출을 위해 특히 안정성과 수용성이 높은 Oxidative Chromogenic Dye를 제공합니다.