RNAi Synthesis Q & A

Pre-designed siRNA 패키지 제품은 무엇입니까?

GenePharma는 Human과 Mouse 유전자를 대상으로 Pre-designed 패키지 제품을 제공합니다. 이 제품은 3개 또는 4개의 후보 siRNA 제품이 제공되며, 부수적으로 Negative control siRNA, FAM-labeled Negative siRNA 그리고 Prositive siRNA까지 제공되어, Cell signaling등을 보고자 할 때 용이합니다.

Pre-designed siRNA 패키지 제품은 어떻게 구매하나요?

Target으로 생각하시는 유전자의 Accession Number만 제공하시면 해당 유전자에 대한 패키지를 제안드립니다.

Pre-designed siRNA 패키지 제품을 사용했는데, inhibition 효과가 나타나지 않습니다. 어떻게 해야 하나요?

동종의 경우라 할지라도 그 세포주의 특성에 따라 효과가 나타나지 않을 수 있습니다. 만일 제공된 모든 siRNA 후보가 50% 이상의 transfection 효율하에서 70%이상의 inhibition 효율을 보이지 않는다면 (단 사용자는 이를 qPCR로 증명할 수 있는 자료를 제출해야 합니다) 1회에 한해서 3개의 다른 후보 siRNA를 무료로 재디자인해 드립니다.

In vitro 실험에 필요한 siRNA의 양은 어느 정도인가요?

사용량은 실험적 조건에 따라 변경 될 수 있습니다. 그러나, 기본적으로 최초 실험에서는 100nM의 농도로 사용해 보시길 권장합니다. 사용하시는 plate의 규격에 따라 사용량을 결정하시기 바랍니다.

100nM = 100nmol/L = 100pmol/ml = l00fmol/ul
예시) 100nM siRNA : 10ml media 기준 1 nmol 사용

siRNA stock을 20uM으로 만들고자 할 때 사용 되는 buffer의 양은 어떻게 계산하나요?

GenePharma의 siRNA, miRNA 제품은 nmol양에 해당하는 dried pellet 형태로 제공됩니다. 따라서 stock의 농도는 아래와 같이 계산될 수 있습니다.

예시) 20nmol siRNA을 구매해서, 50uM stock solution을 만들고자 할 때
(quantity of siRNA, nmol) / (volume for resuspension, uL) = stock concentration, umol/L
20nmol/x ul = 50umol/liter
x ul = 400 ul

RNA 용해를 위해서 무엇을 사용해야 합니까?

1x TE buffer (10mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.1mM EDTA, RNase Free)를 사용하여 RNA를 용해하는 것이 가장 안전한 결과를 얻을수 있습니다. 그러나 Buffer 조성이 문제가 될 수 있다면, RNase free-water를 차선책으로 선택할 수 있습니다.